寨卡病毒实验室检测技术方案
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日期:  2016-2-25


  寨卡病毒(Zika Virus)属黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒 属(Flavivirus),呈球形,直径约为40-70nm,有包膜。基 因组为单股正链 RNA,长度约为 10.8Kb,可分为亚洲型和 非洲型两个基因型。
     寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM 抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应,目前主要采用病毒核酸检测。
     一、检测对象
       (一)疑似和临床诊断病例。
       (二)伊蚊成蚊和幼虫。
     二、样本采集、保存和运输
       (一)病例标本采集。
        对怀疑感染寨卡病毒的患者,推荐采集血清标本开展检测。
        用无菌真空干燥管,采集患者非抗凝血5mL,及时分离血清,分装 2 管,保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内, 标记清楚后低温保存,其中1管用于现场实验室检测,1管用于上级疾病预防控制机构复核。
        对病例应尽可能采集双份血液标本,两份标本之间相隔14天为宜,住院病例可于入院当天和出院前1天各采集一份。
       (二)蚊媒标本采集。
        疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫,分类鉴定后,填写媒介 标本采集信息表,按照采集地点分装,每管10-20只。
       (三)标本保存、运送。 如标本能够在 24 小时内开展实验室检测,应将标本置 于2-8℃保存;如能在7天内开展检测,应将样本置于-20℃ 保存;如需保存7天以上,应将样本置于-70℃以下。
        标本运送时采用低温冷藏运输,避免冻融,样本运输应遵守国家关于三类病原体的相关生物安全规定。
     三、检测方法
        寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM 抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他 病毒具有较强的血清学交叉反应,目前主要采用病毒核酸检测。
        开展蚊媒寨卡病毒检测时,对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
        开展寨卡病毒实验室检测时,应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
       (一)临床标本检测。
        1.病原学检测 病原学检测主要适用于急性期血液标本,一般认为发病7天内检测阳性率高。         

       (1)核酸检测:采用荧光定量 RT-PCR 方法,是目前 早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。       
       (2)病毒分离:将标本接种于蚊源细胞(C6/36)或哺 乳动物细胞(BHK21、Vero)进行分离培养,出现病变以后,用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
        2.血清学检测
       (1)血清特异性IgM 抗体:发病 3 天后可检出病毒特异性IgM抗体,但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性,提示患者可能新近感染 寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西 尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应,易于产生假阳性。
       (2)中和抗体:采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升 高,且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染,可以确诊。
       (二)媒介标本检测。
         1.标本处理
         将分类后的伊蚊成蚊或幼虫,按照采集地点,每10~20 只为一份进行研磨处理。
         2.病毒核酸检测 用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测
         3.病毒分离
         病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。
     四、生物安全
         寨卡病毒在我国归属于三类病原体,应在生物安全二级 实验室(BSL-2)开展实验室检测。应按照《病原微生物实 验室生物安全管理条例》等相关规定要求,做好生物安全防护工作。
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